(Flow cytometry , FCM ) คือเครื่องวิเคราะห์เซลล์ที่วัดความเข้มของแสงเรืองแสงของเครื่องหมายเซลล์ที่ย้อมสี เป็นเทคโนโลยีไฮเทคที่พัฒนาขึ้นจากการวิเคราะห์และการเรียงลำดับเซลล์เดี่ยว สามารถวัดและจำแนกขนาด โครงสร้างภายใน DNA, RNA, โปรตีน, แอนติเจน และคุณสมบัติทางกายภาพหรือทางเคมีอื่นๆ ของเซลล์ได้อย่างรวดเร็ว และสามารถอิงตามการรวบรวมการจำแนกประเภทเหล่านี้
Flow cytometer ส่วนใหญ่ประกอบด้วยห้าส่วนต่อไปนี้:
1 ห้องไหลและระบบฟลูอิกติกส์
2 แหล่งกำเนิดแสงเลเซอร์และระบบสร้างลำแสง
3 ระบบออปติคอล
4 ระบบอิเล็กทรอนิกส์ การจัดเก็บ จอแสดงผล และการวิเคราะห์
5 ระบบคัดแยกเซลล์
ในบรรดาสิ่งเหล่านั้น การกระตุ้นด้วยเลเซอร์ในแหล่งกำเนิดแสงเลเซอร์และระบบการสร้างลำแสงเป็นการวัดหลักของสัญญาณเรืองแสงในโฟลไซโตเมทรี ความเข้มของแสงกระตุ้นและเวลาเปิดรับแสงสัมพันธ์กับความเข้มของสัญญาณเรืองแสง เลเซอร์เป็นแหล่งกำเนิดแสงที่สอดคล้องกันซึ่งสามารถให้แสงสว่างที่มีความยาวคลื่นเดียว ความเข้มสูง และมีความเสถียรสูง เป็นแหล่งกำเนิดแสงกระตุ้นที่เหมาะสำหรับการตอบสนองความต้องการเหล่านี้
มีเลนส์ทรงกระบอกสองตัวอยู่ระหว่างแหล่งกำเนิดเลเซอร์และห้องไหล เลนส์เหล่านี้โฟกัสลำแสงเลเซอร์ที่มีหน้าตัดเป็นวงกลมที่ปล่อยออกมาจากแหล่งกำเนิดเลเซอร์เป็นลำแสงทรงรีที่มีหน้าตัดเล็กกว่า (22 μm × 66 μm) พลังงานเลเซอร์ภายในลำแสงทรงรีนี้จะถูกกระจายตามการกระจายแบบปกติ เพื่อให้มั่นใจว่าเซลล์ต่างๆ ที่ผ่านพื้นที่การตรวจจับด้วยเลเซอร์จะมีความเข้มการส่องสว่างสม่ำเสมอ ในทางกลับกัน ระบบออพติคอลประกอบด้วยชุดเลนส์ รูเข็ม และฟิลเตอร์หลายชุด ซึ่งสามารถแบ่งคร่าวๆ ได้เป็นสองกลุ่ม: ต้นน้ำและปลายน้ำของห้องไหล
ระบบออพติคัลที่ด้านหน้าห้องไหลประกอบด้วยเลนส์และรูเข็ม หน้าที่หลักของเลนส์และรูเข็ม (โดยปกติคือเลนส์สองตัวและรูเข็ม) คือการโฟกัสลำแสงเลเซอร์ที่มีหน้าตัดเป็นวงกลมที่ปล่อยออกมาจากแหล่งกำเนิดเลเซอร์ให้เป็นลำแสงทรงรีที่มีหน้าตัดที่เล็กกว่า สิ่งนี้จะกระจายพลังงานเลเซอร์ตามการกระจายแบบปกติ ทำให้มั่นใจได้ถึงความเข้มของการส่องสว่างที่สม่ำเสมอสำหรับเซลล์ทั่วพื้นที่การตรวจจับด้วยเลเซอร์ และลดการรบกวนจากแสงเล็ดลอด
ตัวกรองมีสามประเภทหลัก:
1: Long pass filter (LPF) - อนุญาตให้เฉพาะแสงที่มีความยาวคลื่นสูงกว่าค่าที่กำหนดเท่านั้นที่จะผ่านได้
2: Short-pass filter (SPF) - อนุญาตให้เฉพาะแสงที่มีความยาวคลื่นต่ำกว่าค่าที่กำหนดเท่านั้นที่จะผ่านได้
3: Bandpass filter (BPF) - อนุญาตให้แสงในช่วงความยาวคลื่นที่กำหนดเท่านั้นที่จะผ่านได้
การใช้ฟิลเตอร์ต่างๆ ร่วมกันสามารถส่งสัญญาณฟลูออเรสเซนซ์ที่ความยาวคลื่นต่างกันไปยังหลอดโฟโตมัลติพลายเออร์ (PMT) แต่ละหลอดได้ ตัวอย่างเช่น ฟิลเตอร์สำหรับตรวจจับแสงสีเขียว (FITC) ที่ด้านหน้า PMT คือ LPF550 และ BPF525 ฟิลเตอร์ที่ใช้ในการตรวจจับแสงเรืองแสงสีส้มแดง (PE) ที่ด้านหน้า PMT คือ LPF600 และ BPF575 ฟิลเตอร์สำหรับตรวจจับแสงสีแดง (CY5) ที่ด้านหน้า PMT คือ LPF650 และ BPF675
Flow cytometry ส่วนใหญ่จะใช้สำหรับการเรียงลำดับเซลล์ ด้วยความก้าวหน้าของเทคโนโลยีคอมพิวเตอร์ การพัฒนาภูมิคุ้มกันวิทยาและการประดิษฐ์เทคโนโลยีโมโนโคลนอลแอนติบอดี การประยุกต์ในด้านชีววิทยา การแพทย์ เภสัชกรรม และสาขาอื่น ๆ กำลังแพร่หลายมากขึ้น การใช้งานเหล่านี้รวมถึงการวิเคราะห์พลวัตของเซลล์ การตายของเซลล์ การพิมพ์ของเซลล์ การวินิจฉัยเนื้องอก การวิเคราะห์ประสิทธิภาพของยา ฯลฯ
เวลาโพสต์: Sep-21-2023
